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分離效果是評判Platinum色譜柱好壞的重要指標(biāo)

更新時間:2015-08-23      點擊次數(shù):3154
   色譜柱是色譜分離系統(tǒng)的心臟,在色譜分離系統(tǒng)中用來分離檢測樣品,起著*的作用。如何看色譜柱的好壞,我們可以從分離效果來入手。本文小編給大家介紹下Platinum色譜柱分離效果的鑒定方法。

  Platinum色譜柱的分離效率由理論塔板數(shù)(簡稱柱效,N)判定,柱效取決于固定相的種類、性質(zhì)(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長、流動相的種類和流速及測定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。N如果峰形對稱并符合正態(tài)分布,可近似表示為:N=16(Tr/W)^2=5.54(Tr/W(1/2))^2=L/H,顯然,N值越大,或H值越小,柱效越高。因此,分離效果主要取決于所選擇的固定相。

  固定相的選擇對樣品的分離起著重要作用,在色譜分離中固定不動,使樣品保留并使之分離。不同類型的色譜采用不同的固定相,如氣-固色譜的固定相為各種具有吸附活性的固體吸附劑;氣-液色譜的固定相是載體表面涂漬的固定液,液相色譜中的固定相為各種鍵合型的硅膠小球,離子交換色譜中的固定相為各種離子交換劑,排阻色譜中的固定相為各種不同類型的凝膠等,常見的吸附柱填料為硅膠柱。

  Platinum色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外,還與填充技術(shù)有關(guān)。必須指出,液相色譜柱的獲得,裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié),但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣,以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結(jié)構(gòu)是否合理。

  柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使Platinum色譜柱達到*效率,柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使的裝填技術(shù),在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應(yīng)對柱效的影響遠遠大于管壁效應(yīng)。

  評判Platinum色譜柱的好壞,使用前都要對其性能進行考察,使用期間或放置一段時間后也要重新檢查。柱性能指標(biāo)包括在一定實驗條件下下的柱壓、理論塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性,或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復(fù)性在±5%或±10%以內(nèi)。進行柱效比較時,還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。具體操作方法如下:

  1.在進行樣品檢測前,至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免細菌產(chǎn)生。

  2.流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合后應(yīng)重新過濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱,以免柱性能損壞。

  3.流動相需脫氣后使用,可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與Platinum色譜柱保存使用的流動相有較大區(qū)別,應(yīng)該使用過度分布的形式進行平衡。避免由于流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結(jié)晶造成對色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。

  評判Platinum色譜柱的好壞可以通過以上指標(biāo)來考慮。

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